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ELISA試劑盒測定法測定抗體

2016-09-05 [1825]

ELISA試劑盒原理
其基本原理可概括為:將特異的抗原-抗體免疫學反應(yīng)和酶學催化反應(yīng)相結(jié)合,以酶促反應(yīng)的放大作用來顯示初級免疫學反應(yīng)。因此,酶免疫技術(shù)一般均有兩部分組成,即一次或數(shù)次免疫學反應(yīng)和一次酶促反應(yīng)。抗原、抗體發(fā)生特異結(jié)合過程中,設(shè)法引入酶結(jié)合物,如酶標記的抗抗體,然后加入酶的底物,在酶催化下生成有色產(chǎn)物,反映出被測定抗原或抗體的量。
ELISA試劑盒操作流程:
檢測抗體多用間接型elisa。以純化抗原包被載體,經(jīng)4℃,以無關(guān)蛋白封閉至少2小時以上,加入待測樣品,室溫孵育1小時,洗滌干凈后加酶標抗體,再經(jīng)室溫孵育、洗滌后,以底物顯色,顯色到一定程度終止反應(yīng),在酶標儀上讀結(jié)果或以肉眼判斷。
類型:elisa具體方法的類型繁多,試劑的標準化問題還未zui后解決,溫育的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)等都是影響測定的因素。但參考以上基本過程,無論怎樣變化,均離不開抗原-抗體反應(yīng)、酶標抗體的免疫學反應(yīng)及酶催化作用。
特點:
1、敏感性高,可檢出濃度在ug~mg/ml水平;
2、特異性強;
3、重復性好;
4、快速、簡便、廉價。
實驗條件
固相載體:可作為固相載體的物質(zhì)很多,如:纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯(lián)葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等??梢愿鞣N形式出現(xiàn);試管、微量反應(yīng)板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯制品,其吸附性。固相包被的機制一般不外乎物理吸附和共價交聯(lián),
封閉:以無關(guān)蛋白占據(jù)載體上未被包被的空隙,常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待測樣品:稀釋度要合適,濃度太大會發(fā)生非特異性吸附造成假陽性,過分稀釋會影響抗原-抗體之間的免疫學反應(yīng)。選擇zui適稀釋度,在實驗體系中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜。
酶結(jié)合物:使用高質(zhì)量的酶結(jié)合物是elisa成功的關(guān)鍵。
ELISA試劑盒注意事項
酶聯(lián)免疫技術(shù)的試劑標準化問題尚未完*,溫育過程的時間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)都是影響zui后測定的因素。為使實驗得到滿意的結(jié)果,在操作過程中應(yīng)作到
1、每次試驗都必須設(shè)陽性和陰性對照。
2、封閉要*。
3、洗滌要測定。

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