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人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23(FGF-23)ELISA試劑盒

2010-11-01 [1651]

 

人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子23(FGF-23)ELISA試劑盒僅供研究使用

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中人胃蛋白酶原A(PGA)水平。用純化的人胃蛋白酶原A(PGA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的胃蛋白酶原A(PGA)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的胃蛋白酶原A(PGA)待檢樣品,溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的胃蛋白酶原A(PGA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人胃蛋白酶原A(PGA)濃度。
試劑盒組成

1
 20倍濃縮洗滌液
 50ml×1瓶
 
 
9
 標(biāo)準(zhǔn)品S1(120μg/L)
 0.5ml×1瓶
 
2
 鏈霉親和素-HRP
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S2(80μg/L)
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶標(biāo)包被板
 12孔×8條
 標(biāo)準(zhǔn)品S3(40μg/L )
 0.5ml×1瓶
 
4
 生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S4(20μg/L )
 0.5ml×1瓶
 
5
 顯色劑A液
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S5(10μg/L)
 0.5ml×1瓶 
 
6
 顯色劑B液
 6ml×1/瓶
 10
 密封袋
 1個(gè)
 
7
 終止液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 3張
 
8
 樣品稀釋液
 6ml×1瓶
 12
 說(shuō)明書(shū)
 1份
 


 
標(biāo)本要求
1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟
1.       根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2.       加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,在樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
3.       配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.       洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。
5.       加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6.       洗滌:操作同4。

7.       加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
8.       洗滌:操作同4。

9.       顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.   終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

11.   測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

 
計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4.  如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。

7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

線形范圍:
5μg/L -150μg/L
規(guī)格:
96人份/盒

保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個(gè)月

ELISA試劑盒

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