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人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒說明書

2010-11-04 [1459]

人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒

使用目的:
本試劑盒用于測定人血清,血漿及其它相關(guān)液體樣本中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)含量。

實驗原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)水平。用純化的人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)待檢樣品,溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)濃度。
試劑盒組成

1
 20倍濃縮洗滌液
 50ml×1瓶
9
 標(biāo)準(zhǔn)品S1(800pg/ml)
 0.5ml×1瓶
 
2
 鏈霉親和素-HRP
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S2(600pg/ml)
 0.5ml×1瓶
 
3
 酶標(biāo)包被板
 12孔×8條
 標(biāo)準(zhǔn)品S3(300pg/ml)
 0.5ml×1瓶
 
4
 生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S4(150pg/ml)
 0.5ml×1瓶
 
5
 顯色劑A液
 6ml×1瓶
 標(biāo)準(zhǔn)品S5(75pg/ml)
 0.5ml×1瓶 
 
6
 顯色劑B液
 6ml×1/瓶
 10
 密封袋
 1個
 
7
 終止液
 6ml×1瓶
 11
 封板膜
 3張
 
8
 樣品稀釋液
 6ml×1瓶
 12
 說明書
 1份
 


 
標(biāo)本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟
1.       根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2.       加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
3.       配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.       洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。
5.       加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

6.       洗滌:操作同4。

7.       加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
8.       洗滌:操作同4。

9.       顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.   終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。

11.   測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 
計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4.  如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

線形范圍:
30pg/ml-1000pg/ml
規(guī)格:
96人份/盒

保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

  
 ELISA試劑盒

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