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怎樣正確溶解與稀釋試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品

2017-03-31 [3170]

ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計(jì)算的尺子,標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA 實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。怎樣正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品呢?
1. 粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心,讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。
2. 根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水,加水后輕柔渦旋震蕩,室溫靜置溶解 10-30min,讓粉末*溶解。
注意:加水后暫不用移液槍吹吸,避免蛋白未溶解,槍頭帶出部分蛋白,待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋
(1)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇:
若血清、血漿、組織勻漿樣本,用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
若細(xì)胞上清樣本,建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
(2)耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備8個(gè)1.5Ml離心管,寫上S1-S7、空白。
(3)梯度稀釋:根據(jù)說明書,每管加入等體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)。吸取同體積溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品到S1管中,吹打10次混勻,渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到 S2管,吹打10次混勻,渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。
(4)空白: 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)作為空白即零濃度。
注意:梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí),渦旋震蕩混勻后可短暫離心,讓到蓋子、壁上的液體到管底,再開始稀釋下個(gè)濃度。

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