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實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作注意事項(xiàng)

2020-11-03 [2328]

1.玻璃器皿的消毒和清潔

新購(gòu)玻璃器皿的處理新購(gòu)玻璃器皿應(yīng)用熱肥皂水洗刷,流水沖洗,再用1%~2%鹽酸溶液浸泡,以除去游離堿,再用水沖洗。對(duì)容量較大的器皿如試劑瓶、燒瓶或量具等,經(jīng)清水洗凈后應(yīng)注入濃鹽酸少許,慢慢轉(zhuǎn)動(dòng),使鹽酸布滿容器內(nèi)壁數(shù)分鐘后傾出鹽酸,再用水沖洗。

2.污染玻璃器皿的處理

①一般試管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%shi炭酸浸泡,再煮沸30分鐘,亦可用肥皂或合成洗滌劑洗刷使盡量產(chǎn)生泡沫,然后用清水沖洗至無(wú)肥皂為止。然后用少量蒸餾水沖洗。

②細(xì)菌培養(yǎng)用的試管和培養(yǎng)皿可先行集中,用1kg/cm2高壓滅菌15~30分鐘,再用熱水洗滌后,用肥皂洗刷,流水沖洗。

③吸管使用后應(yīng)集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小時(shí),逐支用流水反復(fù)沖洗,再用蒸餾水沖洗。

④油蠟沾污的器皿,應(yīng)單獨(dú)滅菌洗滌,先將沾有油污的物質(zhì)棄去,倒置于吸水紙上,100℃烘干半小時(shí),再用堿水煮沸,肥皂洗滌,流水沖洗。必要時(shí)可用二jia苯祛污。

⑤染料沾污的器皿,可先用水沖洗,后用清潔或稀鹽酸洗脫染料,再用清水沖洗。一般染色劑呈堿性,所以不宜用肥皂的堿水洗滌。

⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡,取出后流水沖洗,再用肥皂或弱堿性煮沸,自然冷卻后,流水沖洗。被結(jié)核桿菌污染或不易洗凈的玻片,可置于清潔液內(nèi)浸泡后再?zèng)_洗。

3.無(wú)菌器材和液體的準(zhǔn)備

將玻璃器具中的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、試管、吸管等按上述方法洗凈烘干后,用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花,裝入干凈的鋁盒或鐵盒中,于120℃的干燥箱中干燥滅菌2小時(shí),取出備用。對(duì)于手術(shù)器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液,則采用高壓蒸氣滅菌法,即在15磅的條件下,加熱20分鐘。而對(duì)于MEM培養(yǎng)液、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負(fù)壓抽濾后使用。

4.在無(wú)菌操作過(guò)程中,重要的是要保持工作區(qū)的無(wú)菌、清潔。

因此,在操作前20~30分鐘要先啟動(dòng)超凈臺(tái)和紫外燈,并認(rèn)真洗手和消毒。在操作時(shí),嚴(yán)禁喧嘩,嚴(yán)禁用手直接拿無(wú)菌物品,如瓶塞等,而必須用消毒的止血鉗、鑷子等。培養(yǎng)瓶應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)操作,并且在開啟和加蓋瓶塞時(shí)需反復(fù)用酒精燈燒。對(duì)于吸管應(yīng)先用手拿后1/3處,戴上膠皮乳頭,并用酒精燈燒烤之后再吸液體。

5.常用清潔液的配制法

①重鉻suan鉀清潔液:可根據(jù)不同需要,選用下列的任何一種濃度。先將重鉻suan鉀溶于水中,再慢慢加入濃硫酸。注意,此時(shí)可產(chǎn)生高熱,應(yīng)防止容器破裂。重鉻suan鉀清潔液除污力強(qiáng),腐蝕性大,應(yīng)避免接觸皮膚和衣服。為防止吸收空氣的水分而變質(zhì),此液應(yīng)貯存于帶蓋的容器中。如清潔效力較差,可再加入少量重鉻suan鉀及濃硫酸,還可繼續(xù)使用。直到液體變藍(lán)綠色,即不能再用。配制重鉻suan鉀清潔液時(shí),宜用耐高溫的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用玻璃器皿時(shí),應(yīng)特別注意防止產(chǎn)生高熱而破裂,切忌用量筒來(lái)配制。

②磷酸三鈉將其配成5%~10%水溶液,可用于洗滌玻璃器皿上的油污,但經(jīng)常使用腐蝕玻璃,使器皿表面模糊、毛糙。

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