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研域(上海)小鼠ELISA試劑盒的保溫溫度

2023-06-21 [902]

小鼠ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將大鼠ELISA試劑盒板置于水浴箱中,ELISA試劑盒板底應(yīng)貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA試劑盒板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui后將ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。為避免酶標板底部受水汽或磨損導(dǎo)致的讀數(shù)誤差,一般采用鼓風(fēng)恒溫箱保溫,這個過程必須在酶標板上方貼封紙,以免蒸發(fā)。無論是水浴還是濕盒溫育,反應(yīng)板均不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng),操作時的室溫應(yīng)嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),標準室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可。溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。

加標本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣(一般不建議使用)。有些指標檢測(如間接法ELISA試劑盒)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1min。加酶結(jié)合物工作液和底物工作液時可用多道移液器,使加液過程在zui短時間內(nèi)完成。

溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達。為加速反應(yīng),可提高反應(yīng)的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中過夜,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA試劑盒中一般不予采用。

小鼠ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。

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