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生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)

2011-11-07 [3144]

生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)

20世紀(jì)70年代后期在免疫酶技術(shù)中利用生物素-親和素系統(tǒng)(biotin-avidinsystem,BAS)標(biāo)記抗體發(fā)展了又一種新型生物反應(yīng)放大技術(shù),即BAS-ELISA技術(shù),它使用生物素-親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物作為指示劑,組成一新的生物放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感度。生物素(biotin)是廣泛分布于動(dòng)植物體內(nèi)的一種生長(zhǎng)因子,又稱(chēng)輔酶R或維生素H。親和素(avidin)是卵白及某些微生物中的一種蛋白質(zhì),由4個(gè)亞單位組成。二者有高度親和力,且均能偶聯(lián)抗體、抗原和辣根過(guò)氧化物酶而不影響其生物學(xué)活性。
生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)
在生物素-親和素系統(tǒng)中,借助所形成的親和素-生物素-酶復(fù)合物,追蹤生物素標(biāo)記的抗原或抗體,通過(guò)酶催化底物顯色,可檢出相應(yīng)的抗體或抗原。由于抗原或抗體分子可偶聯(lián)多個(gè)生物素,且1個(gè)親和素分子可結(jié)合4個(gè)生物素分子,組成新的生物放大系統(tǒng),進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度。由于BAS親和力高,所以具有高靈敏度、高特異性和穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn),在現(xiàn)代生物免疫學(xué)領(lǐng)域中已得到廣泛應(yīng)用,并顯示出明顯的*性。已報(bào)道有用于放射免疫、免疫熒光和免疫電鏡等技術(shù)中,但應(yīng)用更多的還是在酶免疫技術(shù)中。
生物素-親和素系統(tǒng)(BAS)ELISA和免疫組化技術(shù)
BAS用于檢測(cè)的基本方法可分為三大類(lèi):

*類(lèi)是標(biāo)記親和素連接生物素化大分子反應(yīng)體系,稱(chēng)BA法,或標(biāo)記親和素生物素法(LAB);

第二類(lèi)以親和素兩端分別連接生物素化大分子反應(yīng)體系和標(biāo)記生物素,稱(chēng)為BAB法,或橋聯(lián)親和素-生物素法(BRAB);

第三類(lèi)是將親和素與酶標(biāo)生物素共溫形成親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物,再與生物素化的抗抗體接觸時(shí),將抗原-抗體反應(yīng)體系與ABC標(biāo)記體系連成一體,稱(chēng)為ABC法。

免疫組化技術(shù)(immunohitochemistry teehenique)是應(yīng)用標(biāo)記的特異性抗體與組織或細(xì)胞抗原發(fā)生反應(yīng),結(jié)合形態(tài)學(xué)觀(guān)察,對(duì)抗原作定性、定量、定位檢測(cè)。它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見(jiàn)性巧妙地結(jié)合起來(lái),借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用,在細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等),并可在原位顯示相應(yīng)的基因和基因表達(dá)產(chǎn)物。免疫組化技術(shù)近年來(lái)得到迅速發(fā)展。20世紀(jì)50年代還于免疫熒光技術(shù),之后逐漸發(fā)展建立起高度敏感,且更為實(shí)用的免疫酶技術(shù)。常用的技術(shù)包括酶免疫組化(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記)、免疫金組化(膠體金顆粒標(biāo)記)、免疫電鏡技術(shù)(鐵蛋白、膠體金、過(guò)氧化物酶標(biāo)記)等。

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