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免疫組織化學(xué)的概念

2011-12-23 [1693]

免疫組織化學(xué)的概念
免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)。
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體有哪些?
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本有哪些?
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本zui常用、zui基本的方法,對(duì)于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對(duì)照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中的組織標(biāo)本制作方法。
石蠟切片為什么要做抗原修復(fù)?有哪些方法?
石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定,使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC染色時(shí),需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露,即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。
常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法,高壓加熱法,酶消化法,水煮加熱法等,常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。
免疫組化常用的染色方法有哪些?
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素——抗生物素染色法zui常用。
抗體交叉反應(yīng)的原因: 指抗體除與其相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)外還與其它抗原發(fā)生反應(yīng)。產(chǎn)生的原因有以下幾個(gè)方面:1.抗原特異性指用于免疫動(dòng)物的抗原性物質(zhì)中含有多種抗原分子,它引起動(dòng)物產(chǎn)生針對(duì)多種抗原分子特異性的相應(yīng)抗體。任何其它物質(zhì)只要含有一種或多種與上述物質(zhì)相同的抗原分子,必將與上述多特異性的抗血清發(fā)生交叉反應(yīng)。2.共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。3.決定簇相似,兩種不同的抗原決定簇,如果結(jié)構(gòu)大致相同,由于空間構(gòu)象關(guān)系,某一決定簇的相應(yīng)抗體可以與大致相同的決定簇發(fā)生交叉反應(yīng)。當(dāng)然抗原一抗體之間構(gòu)象相似時(shí)的結(jié)合力小于吻合時(shí)的結(jié)合力。
免疫組織化學(xué)的概念
 

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