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正常人外周血白細(xì)胞的分離-自然沉降法

2012-01-13 [3163]

正常人外周血白細(xì)胞的分離-自然沉降法
正常人外周血紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為6000~1000:1,兩類細(xì)胞的沉降速度不同,進(jìn)行正常人外周血白細(xì)胞分離。

1 、試劑及配制
1)無Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液。
2)含10%~20% 滅活小牛血清Hank’s液。

2 、操作方法
1)取靜脈血2ml,放入加有抗凝劑的試管中,輕輕混勻。
2)將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30~60min,待紅細(xì)胞自然沉降。此時(shí)可見試管中的懸液分3層,上層為淡血漿,底層為紅細(xì)胞,在緊貼紅細(xì)胞層上有一呈灰白色的白細(xì)胞層(正常人外周血白細(xì)胞)。
3) 用毛細(xì)管吸取位于紅細(xì)胞層上面的富含白細(xì)胞的細(xì)胞懸液,移入另一試管中;
4) 加入無Ca2+ 、Mg2+ Hank’s液至離試管口3cm處,混勻,以水平離心機(jī)2000r/min 離心10min,棄上清,同法在洗滌兩次。
5)沉淀細(xì)胞用適量10%~20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸,計(jì)數(shù),配成所需的細(xì)胞濃度的懸液,一般常用2×106 /min。

正常人外周血白細(xì)胞的分離-自然沉降法
 

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