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細(xì)胞培養(yǎng)基技術(shù)說明

2024-10-14 [688]

       在醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)研究中應(yīng)用廣泛的是外周血淋巴細(xì)胞、皮膚或纖維細(xì)胞和各種能在體外長期生長的細(xì)胞系。外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基具有時(shí)間短、技術(shù)簡便、可重復(fù)取材等優(yōu)點(diǎn),它在臨床染色體分析中使用廣泛。體外培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基株可在培養(yǎng)過程中發(fā)生自發(fā)的或在外界作用下的轉(zhuǎn)化,成為細(xì)胞系,也可直接建成細(xì)胞系,細(xì)胞培養(yǎng)基系能在體外無取制的傳代和生長。細(xì)胞系通常具有非整倍體細(xì)胞和各個(gè)細(xì)胞的核型不相同特征。但細(xì)胞克隆的細(xì)胞系其這一特征可以不明顯。

細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。

1、無污染環(huán)境

       培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞培養(yǎng)基生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí),與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等,可導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)基死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中,保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時(shí)清除等,是維持細(xì)胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

  維持培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞培養(yǎng)基的正常代謝會受到影響,甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí),細(xì)胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)基受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞培養(yǎng)基死亡,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)基全部死亡。

3、氣體環(huán)境

  氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)基生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

  二氧化碳既是細(xì)胞培養(yǎng)基代謝產(chǎn)物,也是細(xì)胞培養(yǎng)基生長繁殖所需成分,它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的PH值。大多數(shù)細(xì)胞的適宜PH為7.2-7.4,偏離這一范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。有資料顯示,原代羊水細(xì)胞培養(yǎng)PH6.8時(shí)zui適。

  細(xì)胞培養(yǎng)基液PH濃度的調(diào)節(jié)常用的為加NaHCO3的方法,因?yàn)镹aHCO3可供CO2,但二氧易于逸出,故適用于封閉培養(yǎng),也起緩沖作用,有防止PH迅速變動的特性而用于開放細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中,其zui大優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值。

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