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細(xì)胞培養(yǎng)的技術(shù)說明

2024-11-20 [569]

       因?yàn)樯锂a(chǎn)品都是從細(xì)胞得來,所以可以說細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。通過細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。

 一、傳代

1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。

2.把原有培養(yǎng)基吸掉。

3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。

4.細(xì)胞都變圓后加入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

5.用移液槍吹打細(xì)胞,讓細(xì)胞懸浮起來。

6.把細(xì)胞吸到10ml或15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來。

8.根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般,癌細(xì)胞分5個(gè),正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。

 二、復(fù)蘇

1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動(dòng)(注意防止蓋子不緊致使液體進(jìn)入凍存管)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。

2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

3.把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng),使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

5.根據(jù)細(xì)胞增長(zhǎng)速度2-3天換一次培養(yǎng)基。

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