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如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)的污染問題

2009-09-04 [3459]

    體外培養(yǎng)的細(xì)胞受到嚴(yán)重污染時(shí),有時(shí)即使想盡各種辦法也難以挽回。因此,防止污染,預(yù)防是關(guān)鍵。只有將預(yù)防措施貫穿于整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的始終,才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手:

1、從物品、用品消毒滅菌著手
 
  細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),并在取樣檢菌一周后確認(rèn)無菌才能使用。同時(shí),在無菌過濾操作中,隨著濾過體積的增大,濾膜破損的可能性增加,故應(yīng)選擇zui后過濾的液體進(jìn)行檢測。定期對二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒。具體操作:75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后,使用可移動的紫外燈至少消毒30min,加入高壓滅菌過的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度。也可配制300ml的飽和硫酸銅加3L滅菌超純水混合成硫酸銅溶液加入水槽中。

2、添加抗生素

    各種抗生素性質(zhì)不同,對各種微生物的作用也不同,聯(lián)合應(yīng)用比單用效果好,預(yù)防性應(yīng)用比污染后使用好。但反復(fù)使用抗生素會使微生物產(chǎn)生耐藥性,且對細(xì)胞本身也有一定影響,因此為避免誘導(dǎo)抗藥細(xì)菌,應(yīng)定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗生素,或盡可能不用抗生素處理。

3、從操作者做起
 
(1)進(jìn)無菌室前要*洗手,按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

(2)操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì),吸管再用時(shí)會將其帶到培養(yǎng)液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長,以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細(xì)胞,同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。

(3)操作時(shí)盡量不要談話,咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染?! ?/p>

(4)使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶,開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位,避免直立,以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口,培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。

(5)操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面,用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面。

(6) 吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí),應(yīng)專管,一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。

4、防止細(xì)胞交叉污染
 
  所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定,如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變,可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。重要細(xì)胞系(株)的傳代工作應(yīng)由兩人獨(dú)立進(jìn)行。

5、無菌室的*消毒

  1) 新潔爾滅全面*擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比,zui大的優(yōu)點(diǎn)是便宜,因?yàn)樾聺崰枩?00ml只需5元,而且可以稀釋50倍用,而同樣量的酒精價(jià)格可能是新潔爾滅的幾十倍。
  2)甲醛熏蒸法:甲醛是一種廣譜滅菌劑菌,其水溶液和氣體對各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價(jià)廉,熏蒸消毒時(shí)不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37-40%的甲醛。

其主要用法為:

a)熏蒸消毒:每立方米空間甲醛用量為10~15毫升,熏蒸消毒時(shí)應(yīng)密閉門窗封閉至少4h以上。高錳酸鉀加40%甲醛(1:1)混合后放入一開發(fā)容器中,立即可見白色甲醛煙霧。消毒后可放入25%氨水蒸發(fā)中和刺激氣味。氨水用量為所用甲醛水溶液的一半,時(shí)間為30分鐘。甲醛氣體毒性非常強(qiáng),所以操作時(shí)一定需帶上防毒面具。

b)自然揮發(fā): 將較大量的甲醛水溶液放入一敞開容器中,室內(nèi)溫度保持在18攝氏度以上,同時(shí)室內(nèi)噴水以保持相對濕度在70%以上,經(jīng)16小時(shí)可達(dá)到室內(nèi)消毒的目的




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