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研域生物教您如何選擇elisa試劑盒

2025-02-08 [272]

由于elisa試劑有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),深受廣大朋友的喜愛。而現(xiàn)試劑盒種類頗多,elisa試劑盒的選擇成為了實(shí)驗(yàn)前的重點(diǎn)事項(xiàng)。那么如何選擇合適的elisa試劑盒呢?

一、檢測方式

如今檢測elisa試劑盒有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般elisa檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶,而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測,堿性磷酸酶ap也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外elisa結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。


二、實(shí)驗(yàn)類型

雖然有多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。in-cell Elisa和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)elispot是兩種特殊的類型,in-cell Elisa需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測。elispot有點(diǎn)像蛋白印跡western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行Elisa實(shí)驗(yàn)。

 

三、抗體類型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于elisa檢測,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。


四、交叉反應(yīng)

如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自zhi定動物的抗體越來越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行elisa檢測時(shí),檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題。 

 

以上是研域生物教您如何選擇elisa試劑盒,大家可以參考一下.


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