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細(xì)胞培養(yǎng)過程中的若干問題

2009-09-27 [2525]


 1 冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。 

2 懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理?
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中, 稀釋細(xì)胞濃度即可, 若培養(yǎng)液太多時, 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高, 直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶, 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度, 重復(fù)前述步驟即可。

3 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無法存活。

4 何謂FBS, FCS, CS, HS ? FBS fetal bovine serum 和FCS fetal calf serum 是相同的意思, 兩者都是指胎牛血清, FCS 乃錯誤的使用字眼, 請不要再使用。CS calf serum 則是指小牛血清。HS horseserum 則是指馬血清。
 
5 培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5 % 或10% CO2?或根本沒有影響?
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng), 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10 % CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時, 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。

6 何時須更換培養(yǎng)基?
視細(xì)胞生長密度而定, 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。
 
7 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?
除于特殊篩選系統(tǒng)中外, 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下, 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
 
8 附著性細(xì)胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度?應(yīng)如何處理? 一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中, 保存于-20 °C,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低, 并可減少污染之機(jī)會。

9 如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時,應(yīng)如何處理?
直接滅菌后丟棄之。




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