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ELISA試劑盒標(biāo)本的處理方法

2013-12-24 [965]

可用作ELISA試劑盒測定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、細胞培養(yǎng)上清、細胞、組織等均可作標(biāo)本以測定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進行測定,有些則需經(jīng)預(yù)處理。
◆ 血清:
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◆ 血漿:
應(yīng)根據(jù)ELISA試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應(yīng)再次離心。
◆ 尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◆ 細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◆ 細胞:
檢測細胞的成份時,對于貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后,細胞就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)操作。
◆ 組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分)。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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