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ELISA試劑盒的雙抗體夾心法檢測腦膜炎奈瑟菌可溶性抗原

2014-02-11 [1195]

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

用包被于固相載體的腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)多糖抗體,結(jié)合待測標(biāo)本中的相應(yīng)抗原,再加酶標(biāo)抗體形成夾心,zui后加底物使顯色。顯色深淺在一定范圍內(nèi)與標(biāo)本中腦膜炎奈瑟菌抗原的含量呈正相關(guān)。

主要試劑與器材

1.待檢血清或腦脊液;

2.抗腦膜炎奈瑟菌(A群)多糖抗體;

3.辣根過氧化酶(HRP)標(biāo)記抗體;

4.包被液、稀釋液、終止液;

5.酶標(biāo)儀。

ELISA試劑盒的操作步驟

1.包被抗體的制備:抗腦膜炎奈瑟菌血清用50%飽和硫酸銨鹽析,再通過SPA-Sepharose 4B免疫吸附柱,獲取IgG用于包被。

2.用包被液將包被抗體稀釋成20μg/ml,每孔100μl,4℃12h后用PBS洗3次。

3.待測標(biāo)本(需經(jīng)56℃,30min滅活)孵育2h,洗3次,拍干。

4.每孔加酶標(biāo)抗體(zui適工作稀釋度用方陣法選定)100μl,37℃孵育2h后洗3次,拍干。

5.每孔加底物(鄰苯二胺-H2O2)溶液100μl,37℃ 20min顯色,用2mol/L H2SO4終止反應(yīng),測492nm吸光度(A)。

ELISA試劑盒的結(jié)果分析

用50-100份健康人混合血清按上述elisa測A值,以大于此A值均值的兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差為陽性,也可以P/N值≥2.1為陽性。

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