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ELISA試劑盒的放大系統(tǒng)

2015-08-05 [2058]

    生物素與抗生物素之間具有*的親和力,可以縮短反應(yīng)時間,達到快速檢測的目的。另外,抗體和酶的生物素標(biāo)記率高,又不影響其活性,每個親和素分子能結(jié)合4個生物素,每個生物素能標(biāo)記大量酶分子,使得ELISA的敏感性大大提高,生物素與親和素的結(jié)合也極為穩(wěn)定,ELISA試劑盒不會在洗滌過程中脫落。BA-ELISA是在常規(guī)ELISA的基礎(chǔ)上,結(jié)全生物素(Biotin)與親和素(Avidin)的高度放大作用,形成的一種檢測方法。BA-ELISA分為:

1,LAB法即酶聯(lián)親和素-生物素標(biāo)記法(Labeledavidin-biotin,簡稱LAB)。用辣根過氧化物酶直接標(biāo)記親和素,用生物素標(biāo)記第二抗體。

2,ABC法即酶聯(lián)親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法(Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex,簡稱ABC)。如用鏈霉親和素(Streptavidin),則形成鏈霉親和素-酶聯(lián)生物素復(fù)合物(Streptavidin-Biotin-PeroxidaesComplex,簡稱SABC)。在ABC法中,用生物素標(biāo)記第二抗體,ELISA試劑盒又用生物素標(biāo)記過氧化物酶。在使用前30min,親和素與酶聯(lián)生物素以1:1的比例混勻。1個親和素分子結(jié)合3個生物素分子,親和素剩下的1個結(jié)合點與標(biāo)記第二抗體的生物素結(jié)合,親和素起橋聯(lián)作用。ABC法比PAP(Peroxidase-antiperoxidasetech-nique)法敏感幾十倍。

3,BAB法即酶聯(lián)親和素-生物素橋法(Bridgedavidin-biotin,簡稱BAB)。用游離親和素(或鏈霉親和素)作為橋聯(lián)劑,將生物素標(biāo)記后開成的復(fù)合物與酶標(biāo)記生物素連結(jié)起來,然后進行樣品的檢測。由于標(biāo)記抗體分子上連有多個生物素,因此,ELISA試劑盒zui終形成的抗原-生物素標(biāo)記抗體-親和素-酶標(biāo)生物素復(fù)合物可積聚大量的酶分子;加入相應(yīng)底物后,產(chǎn)生強烈的酶促反應(yīng),大幅度提高檢測的靈敏度。


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