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犬toll樣受體2(TLR2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

2015-12-21 [953]

犬toll樣受體2(TLR2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:
96T
1.5ng/mL -40ng/mL
使用目的:
本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 toll樣受體  2(TLR2)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中犬 toll樣受體  2(TLR2)水平。用純化的犬 toll樣受體  2(TLR2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入   toll  樣受2(TLR2),再與 HRP標(biāo)記的  toll樣受體  2(TLR2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的 toll樣受體  2(TLR2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在  450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中犬  toll樣受體  2(TLR2)濃度。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
2   酶標(biāo)試劑
標(biāo)準(zhǔn)品(80 ng/mL)     0.5ml×1瓶
3   酶標(biāo)包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1瓶
1份
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
標(biāo)本要求犬toll樣受體2(TLR2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
40ng/mL
20ng/mL
10ng/mL
5.0ng/mL
2.5ng/mL
5號標(biāo)準(zhǔn)品
4號標(biāo)準(zhǔn)品
3號標(biāo)準(zhǔn)品
2號標(biāo)準(zhǔn)品
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  5號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  4號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  3號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  2號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

注意事項犬toll樣受體2(TLR2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

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