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ELISA試劑盒的常用結(jié)果判定的方法

2016-04-07 [1544]

1.定性測(cè)定
 (1)ELISA試劑盒陽(yáng)性判定值法(cut-offvalue,CO值):一般為陰性對(duì)照的平均A值加一個(gè)常數(shù),試劑制備嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化,要先計(jì)算出陽(yáng)性對(duì)照A值平均數(shù)和陰性對(duì)照A值平均數(shù)。標(biāo)本A值≥CO值即為陽(yáng)性。
(2)抑制率法:在競(jìng)爭(zhēng)抑制法中結(jié)果可用抑制率表示。
抑制率(%)=(A陰性對(duì)照A-A待測(cè))/陰性對(duì)照X100%,一般以抑制率≥50%為陽(yáng)性試劑盒
2.半定量測(cè)定 結(jié)果一般以滴度表示。將標(biāo)本連續(xù)稀釋后,進(jìn)行ELISA檢測(cè),在陽(yáng)性臨界值以上的zui高稀釋度即為該標(biāo)本的“滴度”。
3.定量測(cè)定 即用己知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA試劑盒測(cè)定,與待測(cè)標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或活性單位表示之。
1 材料與方法
1.1 對(duì)象
115位患者,年齡在32~73歲之間平均(50.8±7.1)歲。都是臨床初步診斷疑為腎病、糖尿病、風(fēng)濕病及心血管病等等不同類型的患者。
1.2 標(biāo)本采集及處理
取每位患者的晨尿4~5ml于冰箱4~8℃保存,收集至115份標(biāo)本之后,1周之內(nèi)同時(shí)采用2種方法測(cè)定。
1.3 試劑與儀器
美國(guó)DPC公司生產(chǎn)的IMMULITE型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀;ELX—800酶標(biāo)儀(美國(guó)BIO-TEK);洗板機(jī)(BIO-RAD,MODEL1575)。
化學(xué)發(fā)光法試劑為:美國(guó)DPC公司生產(chǎn)的YZB/USA 2153-40 白蛋白試劑盒; ELISA法 :尿微量白蛋白ELISA試劑盒。
1.4 方法
1.4.1 化學(xué)發(fā)光法:嚴(yán)格按照美國(guó)DPC公司生產(chǎn)的 白蛋白試劑盒 操作手冊(cè)進(jìn)行。
1.4.2 ELISA 法:嚴(yán)格按照尿微量白蛋白ELISA試劑盒的操作手冊(cè)進(jìn)行。
1.4.3 測(cè)定分析:用上述兩種方法對(duì)上述115份患者尿標(biāo)本微量白蛋白濃度進(jìn)行測(cè)量,分別在ELX—800酶標(biāo)儀上和全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀上直接讀取結(jié)果。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn):采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件,檢測(cè)數(shù)據(jù)表示用x±s,組間數(shù)據(jù)比較用t檢驗(yàn),變量間的變化采用相關(guān)性分析。

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