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PNAS:反義核苷酸治療立新功

2012-09-03 [1822]

芝加哥大學(xué)醫(yī)學(xué)院的研究人員開發(fā)了治療弓形蟲感染的新技術(shù),該技術(shù)能夠在體外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中阻止寄生蟲合成目標(biāo)蛋白,并且使感染初期小鼠體內(nèi)的活寄生蟲減少了超過90%,該研究發(fā)表在Proceedings of the National Academy of Sciences雜志上。

這一靶向的治療技術(shù)由“反義”類核苷酸短鏈和負(fù)責(zé)跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的短肽組成。耶魯大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)曾于4月發(fā)表了類似方法用于治療寄生蟲感染引發(fā)的瘧疾,在這兩項(xiàng)研究中研究人員得到的治療效果都相當(dāng)喜人。

“我們的研究驗(yàn)證了這種技術(shù)的可行性,”文章作者弓形蟲病專家Rima McLeod教授說。“我們使用該技術(shù)跨越了多重細(xì)胞膜,成功將反義鏈插入細(xì)胞內(nèi)寄生蟲的遺傳物質(zhì),并阻止他們合成不同的蛋白。通過反義鏈技術(shù)我們現(xiàn)在有信心關(guān)閉弓形蟲的任意基因。”

“這一技術(shù)對(duì)于非寄生蟲病也有重要意義,”她補(bǔ)充道。目前研究人員正在對(duì)這種技術(shù)治療細(xì)菌或病毒感染(包括Ebola病毒)以及Duchenne型肌營養(yǎng)不良癥的能力進(jìn)行試驗(yàn)。

McLeod及其同事研究的寄生蟲是Toxoplasma gondii,它可能是世界上zui常見的寄生蟲感染。*近三分之一的人口約二十億人感染了這種寄生蟲。T. gondii會(huì)使免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟的個(gè)體發(fā)病,尤其是那些發(fā)生在子宮內(nèi)的感染。它還會(huì)導(dǎo)致免疫缺陷的患者得眼部疾病。

Toxoplasma gondii感染的標(biāo)準(zhǔn)治療方法副作用較大,有些患者對(duì)其特別敏感。目前還沒有能夠在這種寄生蟲潛伏階段消滅它的藥物,也沒有響應(yīng)疫苗。因此“繼續(xù)開發(fā)新的藥物,”McLeod教授說。

研究人員開發(fā)的新技術(shù)包括PMO寡核苷酸(phosphorodiamidate morpholine oligomer),PMO是一種類DNA的短分子,它可以結(jié)合信使RNA并阻止其翻譯成蛋白。研究人員將這種短分子與“傳導(dǎo)肽”相連,傳導(dǎo)肽可以攜帶PMO跨越細(xì)胞膜障礙,他們將連接而成的新分子稱為PPMO。此前McLeod實(shí)驗(yàn)室的研究顯示傳導(dǎo)肽可以將小分子帶入無法治療的寄生蟲潛伏期。

研究人員分別進(jìn)行了體外和動(dòng)物活體實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)這種PPMO可以在感染細(xì)胞和感染小鼠中降低不同蛋白的合成。

他們首先在寄生蟲中插入熒光蛋白和熒光素酶基因,用這種易于檢測(cè)的生物學(xué)標(biāo)記來測(cè)試PPMO的效果。研究人員用靶標(biāo)這些基因片段的低量PPMO處理受到寄生蟲感染的細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)熒光減少了40%-60%。

作者指出,這種技術(shù)也存在著一些問題。首先PPMO的治療指數(shù)較窄,稍微超出zui低有效劑量就會(huì)有毒副作用。T. gondii可以在在視網(wǎng)膜或者大腦細(xì)胞中潛伏很多年,目前研究人員還未能在其潛伏期將其*。研究人員希望未來通過該技術(shù)喚醒潛伏期的寄生蟲,然后用藥物或者靶標(biāo)繁殖期寄生蟲的PPMO將其消滅?;蛘咄ㄟ^靶標(biāo)寄生蟲*的轉(zhuǎn)錄因子和其他蛋白來同時(shí)殺死活躍期和潛伏期的寄生蟲。

隨后他們檢測(cè)了PPMO阻斷二氫葉酸還原酶DHFR合成的能力,寄生蟲需要這種酶來生成葉酸并進(jìn)行繁殖。48小時(shí)后,細(xì)胞內(nèi)寄生蟲的DHFR生產(chǎn)顯著減少。并且靶標(biāo)寄生蟲繁殖相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的PPMO也能成功減少寄生蟲增殖。

研究人員發(fā)現(xiàn),anti-DHFR PPMO對(duì)剛感染寄生蟲的小鼠效果非常強(qiáng),在96小時(shí)之內(nèi)就使寄生蟲數(shù)量減少了83%到97%。“這一技術(shù)具有阻斷任何目標(biāo)分子的潛力,有望用于許多疾病的治療。”McLeod說。

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