ELISA試劑盒使用說明書
ELISA試劑盒質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過程，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量：

一、操作因素對(duì)ELISA結(jié)果的影響ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。以下敘述各個(gè)步驟中的影響因素。

1.加樣

2.溫育

3.洗滌

4.顯色

5.比色

二、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性"和“陰性"來報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值"（cut-off value，CO值），這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。

三、標(biāo)本復(fù)查ELISA手工檢測(cè)過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽性標(biāo)本及少見模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。

四、結(jié)果判斷和報(bào)告常用下列幾種方法表示結(jié)果：

1.定性測(cè)定

2.半定量測(cè)定 結(jié)果一般以滴度表示。

3.定量測(cè)定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.結(jié)果報(bào)告

五、操作步驟：用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法

1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。5. 終止反應(yīng)

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。